傲视天鹰医学考研练习:蛋白质的分离和纯化

傲视天鹰医学考研练习每日一练：蛋白质的分离和纯化

【知识点】蛋白质的分离和纯化蛋白质分离通常就是利用其特殊理化性质，采取透析、盐析、电泳、层析及超速离心等不损伤蛋白质空间构象的物理方法，以满足研究蛋白质结构与功能的需要。（1）蛋白质分离和纯化的方法

方 法	原 理	目 的
透析	利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物（如硫酸铵、水）分开	去除蛋白质溶液中的小分子化合物，浓缩蛋白质溶液
超滤法	应用正压或离心力使蛋白质溶液透过超滤膜
丙酮沉淀	①必须在0~4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积②蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离，否则蛋白质会变形	沉淀蛋白质
盐析	将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，即去除蛋白质在水溶液中的稳定性因素	沉淀蛋白质
免疫沉淀	蛋白质具有抗原性，利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。	沉淀蛋白质
电泳	蛋白质在高于或低于其pI的溶液中成为带电颗粒，在电场中能向正极或负极方向移动，带电多、分子量小的蛋白质泳动速率快	分离蛋白质
层析	待分离蛋白质溶液经过一个固态物质时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小（凝胶过滤）、电荷多少（离子交换层析）及亲和力（亲和力层析）等分离蛋白质	分离蛋白质
超速离心	利用蛋白质颗粒沉降行为（沉降系数）不同分离蛋白质	分离蛋白质

（2）阴离子交换层析     将阴离子交换树脂颗粒填充在层析管内，由于阴离子交换树脂颗粒上带正电荷，能吸引溶液中的阴离子。然后再用含阴离子（如cl-）的溶液洗柱。含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。增加cl-浓度，含负电量多的蛋白质也被洗脱下来，于是两种蛋白质被分开。（3）凝胶过滤     又称分子筛层析。层析柱内填满带有小孔的颗粒（常由葡聚糖制成）。蛋白质溶液加于柱之顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱内滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离。【注意】①阴离子交换层析时，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来，而含负电量多的蛋白质后被洗脱下来。

②凝胶过滤时，大分子蛋白质由于不能进入孔内而被首先洗脱下来，而小分子蛋白质后被洗脱下来。

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