傲视天鹰医学考研练习:重组DNA技术中常用的载体

时间:2019-9-12 分享到:

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傲视天鹰医学考研练习每日一练:重组DNA技术中常用的载体

【知识点】重组DNA技术中常用的载体

载体是为携带目的的外源DNA片段,实现外源DNA在受体细胞中的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。载体按功能分为克隆载体和表达载体两大类。克隆载体用于外源DNA片段的克隆和在受体细胞中的扩增;表达载体则用于外源基因的表达。有的载体兼具克隆和表达两种功能。

(1)克隆载体      克隆载体应具备的基本特点:①至少有一个复制起点使载体在宿主细胞中进行自主复制,并能使克隆的外源DNA片段得到同步扩展;②至少有一个选择标志:选择标志是区分含与不含载体的细胞所必需的,如抗生素抗性基因等;③有适应的RE的单一切点:载体中一般都构建有一段特异性核苷酸序列,在这段序列中包含了多个RE的单一切点,可供外源基因插入时选择,这样的序列称多克隆位点。

常用的克隆载体主要有质粒、噬菌体(病毒)DNA等。

①质粒     主要存在于细胞染色体外的、能自主复制和稳定遗传的DNA分子,通常为环状双链的超螺旋结构。

②噬菌体DNA     常被用作克隆载体的噬菌体DNA有λ和M13噬菌体DNA。

③其他克隆载体     为增加克隆载体插入外源基因的容量,还设计有柯斯质粒载体(又称粘粒载体)、细菌人工染色体载体和酵母人工染色体载体等。

(2)表达载体     是指用来在宿主细胞中表达外源基因的载体,依据其宿主细胞的不同可分为原核表达载体和真核表达载体。前者中以大肠杆菌表达载体应用最广泛;后者主要分为酵母表达载体、昆虫表达载体和哺乳类细胞表达载体等。

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