(1)克隆载体 克隆载体应具备的基本特点:①至少有一个复制起点使载体在宿主细胞中进行自主复制,并能使克隆的外源DNA片段得到同步扩展;②至少有一个选择标志:选择标志是区分含与不含载体的细胞所必需的,如抗生素抗性基因等;③有适应的RE的单一切点:载体中一般都构建有一段特异性核苷酸序列,在这段序列中包含了多个RE的单一切点,可供外源基因插入时选择,这样的序列称多克隆位点。
常用的克隆载体主要有质粒、噬菌体(病毒)DNA等。
①质粒 主要存在于细胞染色体外的、能自主复制和稳定遗传的DNA分子,通常为环状双链的超螺旋结构。
②噬菌体DNA 常被用作克隆载体的噬菌体DNA有λ和M13噬菌体DNA。
③其他克隆载体 为增加克隆载体插入外源基因的容量,还设计有柯斯质粒载体(又称粘粒载体)、细菌人工染色体载体和酵母人工染色体载体等。
(2)表达载体 是指用来在宿主细胞中表达外源基因的载体,依据其宿主细胞的不同可分为原核表达载体和真核表达载体。前者中以大肠杆菌表达载体应用最广泛;后者主要分为酵母表达载体、昆虫表达载体和哺乳类细胞表达载体等。
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